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SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳注意事项

提问网友 发布时间:2024-10-24 13:34
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1个回答
热心网友 回答时间:2024-11-04 14:55

SDS与蛋白质的结合是按照质量比进行的,即1.4g的SDS与每克蛋白质相配比。蛋白质的含量必须严格控制,不能超出规定范围,否则SDS的结合量就会不足,影响实验结果。


使用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的相对分子量时,必须同时制作标准曲线。然而,这一标准曲线不能直接应用于下一次实验。使用SDS-PAGE测定的分子量可能存在10%的误差,因此不能完全信任这个结果。


某些蛋白质是由亚基(例如血红蛋白)或两条以上肽链(如Q-胰凝乳蛋白酶)组成的。在巯基乙醇和SDS的作用下,这些蛋白质会分解成亚基或多条单肽链。因此,对于这一类蛋白质,SDS-聚内烯酰胺凝胶电泳法测定的只是它们的相对分子量。


对于某些蛋白质(例如电荷异常或结构异常的蛋白质;带有较大辅基的蛋白质),不能使用该方法来测定相对分子量。如果实验中出现拖尾、染色带的背景不清晰等情况,这可能是由于SDS的不纯引起的问题。


扩展资料

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术首先在1967年由Shapir0建立,其原理:聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N,N’一亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂过硫酸铰(AP),N,N,N’,N’ 四甲基乙二胺(TEMED)作用下,聚合交联向成的具有网状立体结构的凝胶,并以此为支持物进行电泳。

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