快速测定饲料和粪便中脂肪酸总量和组成的方法，采用苯作为一步甲基化试剂。对于松散的样品如饲料和粪便，建议使用15厘米X2.5厘米的培养管，其他样品则使用12厘米X1.5厘米的管子更为合适。每个试管内需加入1毫升含苯内标，1毫升苯，和3毫升新鲜制作的5%甲醇盐酸溶液。盐酸需缓慢加入10毫升乙酰氯至100毫升无水甲醇中，确保溶剂缓缓倾倒，不触碰管壁的材料。随后，紧密盖住培养管，通过涡流快速搅拌1分钟，确保材料距离底部2-3厘米。涡流操作必不可少，但需谨慎进行，以防样本扩散至管壁导致酯交换反应不完整。培养管在70℃水浴中加热2小时。若溶剂漏出，需添加2毫升苯并冷却后，再次放回水浴中确保完整甲基化。冷却至室温后，首先加入5毫升6%的K2C03溶液，再加入2毫升苯。乙酰氯在反应混合物中使pH值降至1-2，增加pH至中性是防止聚酯降解的必要步骤。使用薄涂GLC毛细管柱进行反应物分析（Rogiers,1977）。在管内物质进行1/2分钟的涡流处理中速（1500rpm），然后以5分钟的1500rpm离心。上层有机相（苯）用巴斯德吸管转移到10厘米X21厘米的螺旋帽文化管中。苯萃取物再加入1克无水硫酸钠及1克活性炭（如有颜色），样品在1/2分钟的涡流处理后，以1500rpm速度离心1小时。清洗干净的苯层含甲酯被转移到10cmX1cm的培养管，供GLC分析使用。确保酯化完全，通过薄层色谱法分析（TLC），使用苯-乙醚-乙酸乙酯-乙酸乙酯（80:10:10:2,v/v）显影体系，脂肪酸酯斑点可视化表征，以碘蒸气进行。对于乳脂的酰基转移，乳脂通过牛奶洗涤剂提取（Stine et al.， 1954）。样品进行酯交换后，试管置于冰上，快速转移并盖上盖子，以避免挥发性短链脂肪酸甲酯的损失。索氏提取和酯化操作中，准确称量1g样品至棉花顶针（22X80毫米），加入含4mg内标物的石油醚（2ml），然后加入石油醚（100ml）或10%冰醋酸，进行6小时提取，在40℃以下氮干燥后记录粗脂重量。粗脂重溶于5-10ml苯，转移到15cmX2.5cm的螺盖管中，进一步浓缩至2ml，再进行酯交换反应。
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回答时间：1天前
