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血清脂蛋白电泳操作方法

提问网友 发布时间:2024-10-07 12:27
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热心网友 回答时间:2024-10-08 12:19

在进行血清脂蛋白电泳操作时,首先,需要将适量缓冲液加入电泳槽内,并确保两侧槽内液面一致。接下来,准备醋酸纤维素薄膜。在薄膜的负极侧1.5cm处用铅笔划一横线作为点样标记,随后编号并标明正负极。将薄膜浸入巴比妥-巴比妥钠缓冲液中,充分浸透后,夹在滤纸间吸去多余液体。


将薄膜毛面向上贴于电泳槽支架,用微量吸管取3~5微升无溶血血清,沿横线均匀点样,确保样品与薄膜边缘保持一定距离。血清渗入后,反转薄膜使光面朝上,贴紧支架,并用滤纸或纱布连接薄膜两端与缓冲液。然后,接通电源,注意正负极的连接,电压设置为90~150V,电流控制在0.4~0.6mA/cm。夏季电泳时间约45min,冬季稍长,约为60min,直到蛋白区带展开约25~35mm。


电泳结束后,立即进行染色。将薄膜浸入丽春红S或氨基黑10B染液中,染色5~10min,直到白蛋白区带染透。随后,用漂洗液去除剩余染料,直到背景无色。定量部分有三种方法:



比色法:漂洗后,剪下染色区带,白蛋白管加入0.4mol/L氢氧化钠,其余各管加入3ml,振荡后在37℃下浸出色泽。氨基黑10B染色时,测量620nm处吸光度,计算含量(空白对照);丽春红S则用0.1mol/L氢氧化钠,计算520nm处吸光度。
光密度计扫描法:先透明薄膜,然后用恒温烘箱处理,再扫描分析各蛋白区带的密度。
扫描定量:将已透明的薄膜放入光密度计暗箱,进行扫描分析,以确定各脂蛋白的含量。

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