HIV核酸检测HIV核酸检测方法及程序

HIV核酸检测方法及程序

一、HIV核酸定性检测

1.1 方法和试剂

1.1.1 方法：HIV核酸定性检测采用商品化试剂盒或实验室自建方法，商品化试剂需严格遵循说明书操作。实验室自建方法如下：

(1) 使用逆转录PCR（RT-PCR）方法检测血浆或血清样品，建议第一轮PCR扩增使用RT-PCR一步法。血细胞或组织样品则使用PCR方法，一般采用扩增两轮的套式PCR方法。

(2) 设立阳性、阴性及空白对照，阳性对照含目的基因，阴性对照不含目的基因，与待测样品处理程序一致。阴性对照数量应根据实验样品数量设置，并分散放置。

1.1.2 试剂：PCR引物用于扩增HIV gag、pol、env、LTR等区域。进行RNA逆转录时可使用下游特异性引物或随机引物。引物设计可参考文献或自行设计，应广泛覆盖常见HIV流行毒株。抗污染试剂用于实验室自建检测方法。

1.2 扩增目的基因片段

1.2.1 样品采集和处理：收集样品并妥善处理，避免RNA降解。DNA保存于-20℃，RNA和需长期保存的DNA于-80℃。

1.2.2 核酸提取：使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离或自动化仪器提取，注意保护RNA不被降解。

1.2.3 逆转录合成cDNA：使用商品化试剂，按说明书操作，确保RNA酶抑制剂、dTta等成分充分。

1.2.4 PCR扩增反应：使用商品化试剂，按说明书操作，确保dNTPs、DNA聚合酶、缓冲液和超纯水的量足。

1.3 扩增产物分析及结果报告

1.3.1 扩增产物分析：使用琼脂糖凝胶电泳法，与分子量标准比较，判断扩增片段是否在预期范围内。其他方法如*性内切酶酶切分析、特异性探针杂交分析及DNA序列分析。

1.3.2 结果判定和报告：实验成立需同时满足阳性对照、阴性对照和双份平行样品一致的条件。HIV核酸检测阳性需重复采样复测，复测阳性判定为阳性，阴性则为不确定结果，需进一步检测。

二、HIV核酸定量检测

2.1 方法：主要基于靶核酸扩增RT-PCR和信号放大扩增方法。国内常用方法如NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1、Amplicor Cobas等，其检测线性范围和国际单位关系各不相同。

2.2 试剂：使用注册批准的商品化试剂，严格遵循说明书操作。试剂包含RT-PCR扩增、信号放大扩增、基于核酸序列扩增（NASBA）等。

2.2.1 靶核酸扩增试剂和性能：NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1、Amplicor HIV-1 Monitor v1.5等试剂，使用不同的设备和方法，如实时荧光探针分析法、微颗粒酶免疫分析法等，检测线性范围和国际单位关系有所不同。

2.2.2 信号放大扩增试剂和性能：Versant HIV-1 RNA 3.0.bDNA试剂盒，利用分枝状DNA多级信号放大原理，无需RNA纯化和PCR扩增步骤。

2.2.3 实时荧光定量PCR技术：实时荧光定量PCR技术在PCR反应体系中加入荧光基团，监测PCR进程，通过标准曲线定量分析样品。

三、集合核酸定性检测

3.1 样品集合程序：根据样品量计算集合数量，依次集合并检测，同时制备阴性及阳性集合外部质控品用于RT-PCR检测。

3.2 集合样品的检测和分解路线：使用商品化试剂，严格按照说明书进行检测，集合样品数量根据试剂方案调整。

四、婴幼儿HIV感染核酸检测

4.1 适用范围：未满18个月的HIV感染产妇所生婴幼儿。

4.2 检测程序及结果报告：在婴儿出生后6周采集第一份血样本检测，若阳性尽快采集第二份血样本，若两份均阳性诊断HIV感染。若第一份阴性，满3个月再次检测。满3个月再次检测阴性，视为未感染，满12个月后开始HIV抗体检测。

五、结论

以上概述了HIV核酸检测的定性及定量方法、集合检测以及婴幼儿HIV感染的早期诊断流程，确保了HIV感染的早期发现和及时治疗。

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